一、试剂准备 1、SDS-PAGE 试剂:见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 2、匀浆缓冲液:1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml;10%SDS 6.0 ml;β-巯基乙醇 0.2 ml;ddH2O 2.8 ml。 3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9 g;Tris 5.8 g;SDS 0.37 g;甲醇 200 ml;加 ddH2O 定容至 1000 ml。 4.、0.01 M PBS(pH7.4):NaCl 8.0 g;KCl 0.2 g;Na2 HPO4 1.44 g;KH2PO40.24 g;加 ddH2O 至 1000 ml。 5、膜染色液:考马斯亮兰 0.2 g;甲醇 80 ml;乙酸 2 ml;ddH2O118 ml。包被液(5% 脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉 1.0 g 溶于 20 ml 的 0.01 M PBS 中。 6、显色液:DAB 6.0 mg;0.01 M PBS 10.0 ml;硫酸镍胺 0.1 ml;H202 1.0 μl。
了解详情 >>免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
了解详情 >>根据卫生部规定,HIV抗体阳性报告必须由卫生部认证并取得资格的艾滋病病毒抗体确认实验室出具才有法律效应。最常用的HIV抗体确认实验方法是免疫印迹法(Western Blot,WB)。HIV抗体确认实验结果的评价:免疫印迹实验的结果是根据硝酸纤维素条膜特异性HIV抗原位置上出现的带型不同来判断HIV抗体为阳性、阴性和不确定。
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